Arbeiten mit Mikroorganismen | Jg. 12-13
[ früherer Kurstitel: Grünes Licht für Bakterien ]
Beschreibung
Für viele molekularbiologische Untersuchungen eignen sich Plasmide in besonderem Maße als Vektormoleküle. Über sie gelangt ein Fremdgen in die Bakterien (Transformation), deren Kolonien dann als Klone die rekombinierte DNA enthalten und als Lieferanten für das gewünschte Gen-Produkt dienen.
In unserem Experiment verwenden wir ein Plasmid, in dem ein Teil des Arabinose-Operons durch ein eukaryotisches Gen ersetzt wurde, das für ein grün fluoreszierendes Protein (GFP) kodiert. Durch dessen Anregung mit UV-Bestrahlung können die erfolgreich transformierten Bakterienkolonien auf einfache Weise sichtbar gemacht werden.
Methoden
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Isolierung der Plasmid-DNA mit Silika-Technologie
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Transformation durch Hitzeschock
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Steriles Arbeiten, Ausplattieren von Bakterien
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Restriktionsverdau (2.Tag)
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Gelelektrophorese und Auswertung (2.Tag)
Wünschenswerte Vorkenntnisse
- Bau der Bakterienzelle
- Plasmide als Träger von Antibiotika-Resistenzgenen
- Plasmide als Vektor und als Selektionsmarker
Dauer
1,5 Tage; 1.Tag ca. 7-8h (einschl. Mittagspause); 2.Tag ca. 5h
Achtung : Aufgrund der Vorbereitungen muss dieser Kurstag mind. 12 Wochen vor dem Termin angemeldet werden.
